背景

葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是天然植物性食品中w常見的5種類胡蘿卜素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，具有維生素A原活性、抗氧化、參與細(xì)胞傳遞、免疫功能調(diào)節(jié)與促進(jìn)、保護(hù)皮膚免于紫外線傷害和抑制黃褐斑生成等諸多生理保健功效。

但這5種類胡蘿卜素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的液相色譜同時(shí)分離測(cè)定一直比較困難，原因是這5種類胡蘿卜素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的極性差異比較大，葉黃素和玉米黃質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)羥基，極性較強(qiáng)，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力較弱，而α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素是烴類物質(zhì)，僅由碳和氫兩種原子構(gòu)成，無(wú)任何極性官能基團(tuán)，極性極弱，在反相液相色譜柱（如C18等）上的保留力*；另外，更為重要是葉黃素和玉米黃質(zhì)之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，兩兩互為同分異構(gòu)體，相互間僅是一個(gè)碳-碳雙鍵的位置差異，液相分離難度大（分子結(jié)構(gòu)詳見附錄A，特征吸收光譜圖詳見附錄B）。

本應(yīng)用案例采用月旭科技公司生產(chǎn)的C30反相高效液相色譜柱、兩元梯度洗脫，實(shí)現(xiàn)了單次高效液相色譜檢測(cè)對(duì)葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分離檢測(cè)，且單次高效液相色譜檢測(cè)費(fèi)時(shí)為35分鐘。

高效液相色譜檢測(cè)條件

1 儀器設(shè)備 Welch 高效液相色譜儀，WiSys5000，配備二級(jí)管陣列檢測(cè)器；

2 液相色譜柱

分析柱：Ultimate XB-C30色譜柱，4.6mm×250mm, 5μm；

保護(hù)柱：Ultimate XB-C30，4.6mm×10mm, 5μm；

3 流動(dòng)相 A相：甲醇:乙腈=1:1；B相：乙酸乙酯；

4 梯度洗脫程序

5 流速 1.0mL/min；

6 檢測(cè)波長(zhǎng) 476nm；

7 柱溫 30℃；

8 進(jìn)樣體積 20μL。

高效液相分離色譜圖

從高效液相檢測(cè)的色譜圖看，不僅單次檢測(cè)，35分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)同時(shí)分離檢測(cè)葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素和番茄紅素這5種類胡蘿卜素類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而且互為同分異構(gòu)體的葉黃素和玉米黃質(zhì)之間，以及α-胡蘿卜素和β-胡蘿卜素之間，都基本實(shí)現(xiàn)了基線分離。

相關(guān)色譜耗材  

附錄A：5種類胡蘿卜素天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)

附錄B：5種類胡蘿卜素天然營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特征吸收光譜圖