答：有時候換色譜系統(tǒng)時梯度方法會出現(xiàn)一些問題。除非系統(tǒng)*一樣，否則保留時間總有些變化。通常這個時間的變化都在分離度的范圍之內(nèi)，忽略它，方法還是可以用的。另外，如果適當(dāng)了解潛在的原因，可以調(diào)節(jié)梯度在不同的色譜系統(tǒng)中得到相同的效果。

另一個涉及到這個問題的是梯度滯后體積。它是從梯度混合處到柱頭的體積。當(dāng)你進(jìn)樣開始分析后，梯度并沒有到達(dá)柱頭，還要等滯后體積排空后才到。這就是說樣品在開始一段時間是等度遷移的。由于不同系統(tǒng)的滯后體積是不同的，所以保留時間就不一樣了，有時候還是影響到分離度。

另一個原因是梯度本身，由系統(tǒng)與系統(tǒng)之間的組分差異導(dǎo)致。對于現(xiàn)在大部分的色譜廠家來說這個問題都不是很嚴(yán)重。但通常，在輸送等比例的流動相時（50%A和50%B）精確度最高，比例相差大時（5%A或95%A）精確度就會受損。

答：zui簡單的做法是比較一下兩個系統(tǒng)的梯度。卸掉柱子，接雙通。（在梯度的B溶液后接紫外檢測器）如果用的是反相色譜，可以在B溶液中加10mg/L的對羥基苯甲酸丙酯。兩個系統(tǒng)都開始運(yùn)行梯度，記錄基線。然后比較一下兩張圖譜。要找到梯度開始的位置，測量梯度圖譜。如果梯度是線性的，只要測量梯度的斜率就可以了。

很可能你會發(fā)現(xiàn)兩臺儀器的梯度開始時間不一樣，圖譜非常類似，梯度結(jié)束時間有一定的改變。這種情況就是說兩臺儀器的梯度滯后體積不一樣。

答：有一個辦法大部分時候可以采用。如果新系統(tǒng)的梯度滯后體積小于轉(zhuǎn)移前系統(tǒng)的體積，可以在梯度開始加一段等度。如果新系統(tǒng)滯后體積大，這種情況就比較困難。原則上你可以先開梯度，延后一段時間進(jìn)樣，這段時間要與兩臺儀器的滯后時間差一致。但在自動系統(tǒng)中就不能這么做，自動系統(tǒng)中是進(jìn)樣觸發(fā)梯度開始的，這時候可能需要手動基線歸零或重新開發(fā)方法。

答：你可以在最終使用的儀器上開發(fā)方法。這可能需要一些預(yù)見與計劃，但通常還是可行的。你需要做的是了解新系統(tǒng)的性能，要知道系統(tǒng)的兩個基本情況：梯度滯后體積和比例精確性。你可以在同一個實驗里得到這兩個數(shù)據(jù)：如前所述，在B溶液后加紫外檢測器，設(shè)置一個多階層的梯度，B溶液以5%的幅度從0%變到100%，流速與平常一樣，應(yīng)該是1mL/min吧。每段梯度大概保持5min。然后接雙通運(yùn)行梯度，記錄圖譜。每段梯度設(shè)置的時間與實際發(fā)生的梯度時間之差就是梯度延遲時間。階層的高度可以用來測量流動相比例。這些階層可能有點(diǎn)模糊，那是由系統(tǒng)中混合體積造成的。 

檢測完系統(tǒng)，就可以按照它的性能來設(shè)計方法了。正如我前面提到的，最大的問題是梯度滯后體積。如果你知道新儀器的滯后體積比開發(fā)方法的儀器大，就要自覺的在方法前加一段等度來抵消這一差別。如果目標(biāo)系統(tǒng)滯后體積小，你就要在轉(zhuǎn)移方法的時候在方法開始加一段梯度延遲時間。

如果比例差別是在梯度運(yùn)行中間出現(xiàn)的，相信你也可以通過調(diào)節(jié)梯度圖譜來抵消這種差別。

這個討論是假設(shè)柱子已經(jīng)用初始流動相充分平衡了。有時我會遇到這樣一些情況，在日常分析中，梯度變化很快，而柱子沒有用初始流動相平衡好。這樣第一針時總是與后面的不一樣。這可能是加快方法的缺點(diǎn)，但是如果轉(zhuǎn)移到有不一樣滯后體積的系統(tǒng)時，可能就會產(chǎn)生一些問題。