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021-50276769在色譜分析過程中常常需要使用緩沖鹽來調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，緩沖鹽的不當(dāng)使用對色譜柱可能造成柱壓升高、柱效下降以及使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化等影響。
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柱壓升高
原因：緩沖鹽使用不當(dāng)導(dǎo)致緩沖鹽析出，堵塞塞板和鍵合相顆粒之間的孔隙，阻礙流動(dòng)相傳質(zhì)，引起柱壓升高；
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相同化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化
原因：如果沒有沖洗干凈就進(jìn)行進(jìn)樣，色譜柱內(nèi)含有的鹽會(huì)使化合物的保留時(shí)間發(fā)生變化；
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柱效下降
原因：
1）有些緩沖鹽會(huì)滲入到鍵合相的深處，損害硅膠基體，導(dǎo)致色譜柱鍵合相流失，柱床變松，柱效下降；
2）凝結(jié)在鍵合相表面，使C18碳鏈難以舒展，對物質(zhì)的保留能力下降，導(dǎo)致柱效下降。因此用過緩沖鹽后需要對色譜柱進(jìn)行沖洗，水中緩沖鹽濃度較大時(shí)應(yīng)特別引起注意。
那么如何正確使用緩沖鹽呢？
使用前的處理：在使用緩沖鹽作流動(dòng)相之前需要用不含緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)。原則上，用于沖洗的流動(dòng)相與分析時(shí)所用的流動(dòng)相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于沖洗用的流動(dòng)相中不含緩沖鹽。緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動(dòng)相的水為飽和的緩沖鹽溶液時(shí))流動(dòng)相進(jìn)行分析時(shí)，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動(dòng)相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時(shí)候所用的流動(dòng)相中如果有機(jī)溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解該緩沖鹽時(shí)，緩沖鹽將會(huì)在色譜柱柱體上析出，沉積下來，這將可能導(dǎo)致上述對色譜柱的損害。
使用后的處理：用與分析時(shí)含水比例相同的流動(dòng)相（與分析用流動(dòng)相wei一的區(qū)別是，用于沖洗的流動(dòng)相不含緩沖鹽）進(jìn)行沖洗約30min，直至基線平穩(wěn)。如果該色譜柱在接下來很長的一段時(shí)間內(nèi)不使用，要長期保存，則需再加上一步，即用純的有機(jī)溶劑沖洗一遍，直至基線平穩(wěn)。
使用緩沖液要注意幾點(diǎn)
01
避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質(zhì)有腐蝕作用。
02
緩沖液是良好的菌類培養(yǎng)液，緩沖液最好要現(xiàn)配現(xiàn)用。
03
實(shí)驗(yàn)后不可用有機(jī)溶劑直接過度，有機(jī)溶劑會(huì)處使鹽類析出，造成液路或色譜柱堵塞。
04
使用緩沖液要及時(shí)掌握pH范圍，做到胸中有數(shù)。
05
清洗液路和柱子時(shí)，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗。
06
長時(shí)間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，可考慮一定周期用10%硝酸沖洗一下液路（拆下柱子，走30mL，再用5倍水沖洗）可以避免液路的堵塞。
07
選擇緩沖液要用可靠的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩。
如果流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例很高是不能用來沖洗緩沖鹽的，是洗不出來的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇沖洗，是可以把緩沖鹽沖洗出來的，然后用純的有機(jī)溶劑來保護(hù)柱子。Z 好的方法是使用與流動(dòng)相相同濃度不含鹽的流動(dòng)相進(jìn)行清洗。但就是速度慢一些。用水是為了快速替換，一般在15分鐘以內(nèi)最好，且用0.8的流速較好。如果用純水沖，容易造成鍵合的碳鏈的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液沖。可以用純水代替流動(dòng)相中的緩沖液，有機(jī)相不變。這樣沖洗柱子比較穩(wěn)妥。
小結(jié)
正確使用緩沖鹽很有必要，既可以防止緩沖鹽析出，也可以達(dá)到提高色譜柱使用壽命的目的。我們不妨用一句話來總結(jié)它的使用方法：用前要過濾，用后需沖洗。
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